Kvantificering av nukleinsyra i spektrofotometrar
Kvantifieringen av nukleinsyror är den mest använda funktionen hos en spektrofotometer. Oligonukleotider, enkelsträngad dubbelsträngad DNA och RNA kan kvantifieras i buffertar. Absorptionssteget för den högsta absorptionssteget av nukleinsyra är 260 nm. Varje nukleinsyra har en annan molekylär sammansättning och har därför olika omvandlingsfaktorer. För att kvantifiera olika typer av nukleinsyror, välj motsvarande koefficienter i förväg. Exempelvis är absorbansen av 1OD ekvivalent med 50 | ig / ml dsDNA, 37 | ig / ml ssDNA, 40 | ig / ml RNA respektive 30 | ig / ml Olig. Absorbansvärdet efter testet omvandlas med ovanstående koefficient för erhållande av motsvarande provkoncentration. Före provningen väljer du rätt procedur, anger volymerna i stamlösningen och spädningsmedlet och testa blank- och provlösningarna. Experimentet var dock inte lätt. Ostabila avläsningar kan vara störst huvudvärk för experimenter. Ju högre känslighet av instrumentet desto större är den uppvisade absorbansdriften.
Faktum är att designprincipen och arbetsprincipen för spektrofotometern tillåter absorbansvärdet att förändras inom ett visst område, det vill säga instrumentet har en viss grad av noggrannhet och noggrannhet. Såsom Eppendorf Biophotometer Noggrannhet ≤ 1,0% (1A). Resultaten av dessa multipeltester varierar mellan medelvärdet av 1,0% och är alla normala. Dessutom måste de fysikalisk-kemiska egenskaperna hos nukleinsyran, buffertens pH för upplösning av nukleinsyran, jonkoncentrationen etc. också beaktas. Under provet kommer för högt en jonkoncentration också att leda till att drivas som TE, vilket i hög grad stabiliserar läsningen. Den utspädda koncentrationen av provet är också en icke försumbar faktor: på grund av den oundvikliga närvaron av små partiklar i provet, speciellt nukleinsyraprover. Närvaron av dessa små partiklar påverkar testeffekten. För att minimera partikelns påverkan på testresultaten måste nukleinsyrans absorbans vara minst 0,1 A och absorbansen är företrädesvis 0,1-1,5 A. I detta intervall måste det inte finnas några bubblor i blandning, och det finns ingen suspension i ämnet. I annat fall driver avläsningarna våldsamt; Samma kolorimetriska kopp måste användas för att testa ämnet och provet. annars är koncentrationsskillnaden för stor. omvandlingskoefficienten och provkoncentrationsenheten är desamma; Kuvetten bärs av fönstret; provvolymen måste nå mer än den önskade minsta volymen hos färgkoppen etc.
Förutom nukleinsyrakoncentrationen visar spektrofotometern flera väldigt viktiga förhållanden samtidigt för att indikera provets renhet, såsom A260 / A280-förhållandet, i syfte att bedöma provets renhet, eftersom proteinets absorptionstopp är 280 nm. Rena prov har ett förhållande större än 1,8 (DNA) eller 2,0 (RNA). Om förhållandet är mindre än 1,8 eller 2,0, indikerar det närvaron av protein eller fenoliska substanser. A230 indikerar att det finns några föroreningar i provet, såsom kolhydrater, peptider, fenoler etc. Förhållandet mellan ren nukleinsyra A260 / A230 är större än 2,0. A320 detekterar lösningens grumlighet och andra störningsfaktorer. Rent prov, A320 är i allmänhet 0.
Företaget är specialiserat på försäljning av spektrofotometrar , välkomna kunder som har behov av att konsultera och köpa, vi kommer att ge dig uppriktiga service- och kvalitetsprodukter samt lägre priser.
E-post: info@sumerlab.com
Web: sumerinstrument.com